Poslato: Pet Apr 22, 2005 7:11 pm----
Danas se sve vishe i vishe prelazi na razmnozavanje biljaka putem meristema.
To ima vishestruke koristi.
Semenom i kalemljenjem se prenose neke neizlechive biljne bolesti (virize), dok se to kod meristemskog razmnozavanja potpuno izbegava.
Dobija se APSOLUTNO IDENTICHNA biljak sa onom od koje smo skinuli meristem.
Negatina strana ovog razmnozavanja je shto to mogu da rade samo opremljene institucije i shto je relativno skupo.
Prvo se skida sa odabrane, zdrave biljke parche meristemskog tkiva (manje od jednog cm!) i ono se dezinfikuje.
Tada se stavlja u sterilnu petri posudu sa agar-agar podlogom na odredjenu temperaturu i vlaznost da se stvari KALUS.
Iz tog kalusa pochinju trerati nove biljchice - neogranichen broj, IDENTICHNIH kao ona biljka sa koje je uzet meristem.
(To je SVE praktichno ona ISTA biljka!)
Zatim se te biljchice pazljivo skidaju i presadjuju na agarnu podlogu sa raznim elementima, karakteristichnim za potreve odredjene kulture koja se umnozava.
Nakon shto ove slabe biljchice malo ojachaju, presadjuju se u male saksijice u kojima je zemljishni supstart sterilisan.
Ovo je najosteljiviji deo cele operacije.
Temperatura i vlaznost moraju biti strogo kontrolisani.
Kad biljke dostignu odredjenu velichinu (zaviosi od vrste) mogu se pazljivo izneti napolje, na svetlo mesto, ali bez direktnog sunca.
Poslato: Pet Apr 22, 2005 8:06 pm----
Sjajno.. !!
Bas bih voleo da sam u mogucnosti da se igram sa tim
Za to treba cela laboratorija
Poslato: Pet Apr 22, 2005 9:19 pm----
da, bas zvuci super.. oduvek su me privlacila experimentisanja
Poslato: Pet Jun 05, 2009 9:58 pm----
ima li ko ikakvog iskustva u razmnozavanju in vitro ,da podeli iskustva sa nama?
bas me zanima tema
gde se mogu naci neke potrebne stvari kao sto cu sterilne petri case ,nesto od laboratoriske opreme menzure ,pipete i tako svasta nesto
a tek nesto od hemije tj.hormona i supstanci potrebne za supstrate ?
agar agar sam svuda trazio nigde nisam nasao cist tj bez primesa,ako neko zna bio bi zahvalam za info ?
Poslato: Ned Jun 07, 2009 10:38 pm----
Kultura tkiva je tehnika koja reproducira sadeci material kroz in vitro multiplikaciju,tj, reprodukciju meristema (tkivo biljke) u specijalnom substratu. Ova tehnika zahtijeva obuceno osoblje I intenzivan rad. Tkivo biljke posjeduje sve karakteristike svojih preselektiranih maticnih biljaka I u potpunosti je slobodna od bolesti,virusa itd. Stoga,visoko kvalitetni pocetni material je proizveden. Nakon svoje laboratorijske faze,delikatne I sicusne biljke se uzgajaju do forme sadnice. Zatim,sadnica se presadjuje (na otvorenom ili u staklenickim uvjetima) I uzgaja do faze gotovog proizvoda sto moze biti cvijet,kontejnerska biljka,povrce ili (vocna) sadnica.
Brza I bezvirusna multiplikacija
Kultura tkiva je multiplikacijska metoda za biljke ,sto moze biti koristeno ako sijanje,cijepanje,dijeljenje I normalno rezanje kao metode ne postizu zeljene rezultate. U principu,to je forma rezanja (vegetativna multiplikacija). Razlika je da sa kulturom tkiva sve je pod kontrolom.
Sa kulturom tkiva samo taj dio biljke iz kojeg pocinje rast ce biti razvijan pod idealnim (vjestackim) uvjetima.
Biljke ce biti ostavljene u komori za rast na u teglama sa hranljivom podlogom :to je zelatinozna tvar koja sadrzi sve hranljive tvari biljci lake za absorbiranje. Biljke su toliko vjestacki stimulirane da cak ne trebaju ni process fotosinteze. Vjestacka svjetlost je obezbijedjena da bi biljke zadrzale zelenu boju.
Veoma mali broj biljaka ce dobiti stimulaciju (u vidu hormonskih preparata) za brzo razvijanje I dijeljenje. Neke biljke se tako brzo dijele da formiraju skupine(strukove). Ostale biljke rastu vise u sirinu I od takvih biljaka bocno isce ce postati nova reznica.
Svakih 6 do 8 sedmica dijelovi biljke se dijele I nanovo sade . Brzina multiplikacije u ovoj fazi zavisi od faktora multiplikacije:broj dijelova iz kojih moze biti formirana tacka rasta tokom jednog sjecenja. Ovaj faktor se uobicajeno krece izmedju 2 I 5.
Primjer: Faktor multiplikacije je 3 ,ciklus rasta je 6 sedmica. Pocnemo sa 10 biljaka ,nakon 6 sedmica dobicemo 30 ,nakon 12 sedmica dobicemo 90 a nakon jedne godine bice vise od 60 000 biljaka!
Faza oziljavanja
Tokom multiplikacijske faze biljke nemaju ili jedva imaju korijenje. Naravno,biljke moraju biti isporucene klijentima sa korijenjem. Zato ce biljke biti postavljene na hranljivu podlogu kojoj su dodani hormoni (sto ce stimulisati oziljavanje) prije nego sto budu isporucene. Ova faza traje 6 do 8 sedmica. Nakon isporuke rasadniku ,biljke ce zahtijevati posebnu njegu. Pazljiva aklimatizacija je veoma vazna za dobar pocetak uzgajanja.
Kultura tkiva je zajednicki pojam za mnogo razlicitih metoda I tehnika. Klasifikacija moze biti prikazana po nacinu na koji je biljka stimulirana na rast I koji dio biljke ce se koristiti. Izbor odredjene tehnike zavisi I od vrste biljke I od cilja multiplikacije. Najcesce koristene metode su dolje navedene.
Kultura meristema
Ova metoda je dobila ime po tome sto je meristem drugi naziv za tacku rasta . Sa ovom metodom ,ekstremna tacka rasta ce biti izdvojena pod mikroskopom. Ovo je vrlo precizan posao ,ali vrijedi truda jer je tacka rasta u ovom slucaju uvijek zdrava bez bolesti (najcesce su to virusi). Ova veoma mala tacka rasta ce biti stavljena na medium (hranljiva podloga) I razvice izdanke te ovo moze biti pocetni material za neke druge metode.
“Auxillaire”(bocna) metoda
Sa ovom metodom ,tacka rasta ce razviti izdanke sa dna . Ovi izdanci ce formirati struk(skupinu). Ovaj struk ce biti izrezan na male dijelove I svaki ce formirati novi struk. Ovo se moze neprestano ponavljati dok se strukovi ne stave na hranljivu podlogu.
Metoda pazusnih pupoljaka
Kod vecine biljaka vec postoji tacka rasta na pazusnom dijelu lisne stabljike. Ako se stabljika slomi iznad (ili se odsijece) pocet ce ponovo rasti. Ova tacka rasta moze biti koristena za multiplikaciju. Nova stabljika ce porasti iz ovog okca,koja ce onda nanovo formirati nekoliko okaca. Nakon 6 do 8 sedmica ova stabljika moze biti rezana I sadjena.
Metoda sjecenja okca
Vrh svake nove stabljike je najbolji kao tacka rasta za dijeljenje.
Somatska embrio geneza
Ovo je potpuno drugaciji nacin multiplikacije.Tacka rasta ce biti ponovno biti svedena na nivo celije. Ove celije se stavljaju u tecan medium u kojem ce formirati nove zasebne celije. One ce biti postavljene na cvrsti medium na kojem ce rasti do forme nove biljke. Ova tehnika se ne moze primjenjivati bas na svakoj biljci. Osim toga,istrazivanja iziskuju velike troskove a rizik je dosta visok.
Infekcija
Sva oprema mora biti sterilna I svi materijali moraju biti pazljivo dezinfekovani prije koristenja. Sve te mjere su iz razloga sto je hranljiva podloga (medium) toliko bogata da pogoduje brzom razmnozavanju gljivica I bakterija. Iz hranljive podloge one napadaju biljku, inficiraju je dok je vrlo slaba I nakon nekog vremena uzrokuju gubitak biljnog materijala.
Rad u sterilnim uvjetima je imperativ. Laboratorijski radnici rade za laminarima cijim sistemom sterilan I visoko cist zrak cirkulise nad biljkom koju obradjuju. Slijedece mjere predostroznosti su :nosenje laboratorijske obuce,redovno dezinficiranje ruku I materijala.
Ako se prenese blago inficirana biljka,infekcija se moze vrlo lako rasiriti. Stoga je vrlo vazno kontrolisati da li postoji infekcija prije obrade I presadjivanja biljke.
Epruvete,kontejneri I plasticne posude
Postoji mnogo razlicitih posuda koje se koriste za kulturu tkiva. Epruvete se koriste u ranoj fazi,kada su biljke po jedna u svakoj epruveti (radi prevencije infekcije).Nakon te faze jeftinije je da se koriste plasticne posude ali to nije moguce koristiti za sve vrste pa se ponekad koriste stakleni kontejneri.
Priprema media : tajna proizvodjaca!
Osim koristenja ispravne metode I precizne tehnike sjecenja,vrlo je vazno na koji se nacin priprema medium. Svaka laboratorija razvija svoj sopstveni recept media po vrsti biljke ,sto podrazumijeva dosta rada I troskova.
Laboratorija kulture tkiva dosta nalikuje farmaciji. Posvuda se nalaze bocice sa prahom,pilule I tekucine. Osim toga postoje neke mjere predostroznosti I tehnike mjerenja jer medium mora biti pripremljen vrlo precizno.
Aplikacije
Brza multiplikacija
Ako se neka sorta brojcano otezano povecava ili se povecava samo u odredjenom periodu godine ,onda je kultura tkiva odlicno rjesenje za brzu multiplikaciju. Unutar laboratorije lakse je uticati na uvjete za razvoj I multiplikacija je moguca tokom citave godine. Brza multiplikacija vodi ka nizim proizvodnim troskovima .
Upotrebom kulture tkiva moguce je vrlo brzo proizvesti veci broj visoko kvalitetnih biljaka .
Brzina je takodje vazna za selektivne kompanije. Rijetka ili nova sorta moze brojcano vrlo brzo biti povecana.
Vise istovjetnog biljnog materijala
Kultura tkiva je zapravo vid kloniranja. Mnogo hiljada potomaka jedne vrlo precizno selektirane maticne biljke ce na kraju omoguciti proizvodnju skoro identicnih proizvoda.
Sezona uzgajanja
Mnoge biljke imaju vrlo specifican period godine kada mogu biti brojcano uvecane . Ovo vodi ka debalansu izmedju ponude I potraznje. Koristeci kulturu tkiva moguce je da bilo koja sorta bude proizvedena u bilo kojem periodu godine.
preuzeto sa sajta
Kultura tkiva je tehnika koja reproducira sadeci material kroz in vitro multiplikaciju,tj, reprodukciju meristema (tkivo biljke) u specijalnom substratu. Ova tehnika zahtijeva obuceno osoblje I intenzivan rad. Tkivo biljke posjeduje sve karakteristike svojih preselektiranih maticnih biljaka I u potpunosti je slobodna od bolesti,virusa itd. Stoga,visoko kvalitetni pocetni material je proizveden. Nakon svoje laboratorijske faze,delikatne I sicusne biljke se uzgajaju do forme sadnice. Zatim,sadnica se presadjuje (na otvorenom ili u staklenickim uvjetima) I uzgaja do faze gotovog proizvoda sto moze biti cvijet,kontejnerska biljka,povrce ili (vocna) sadnica.
Brza I bezvirusna multiplikacija
Kultura tkiva je multiplikacijska metoda za biljke ,sto moze biti koristeno ako sijanje,cijepanje,dijeljenje I normalno rezanje kao metode ne postizu zeljene rezultate. U principu,to je forma rezanja (vegetativna multiplikacija). Razlika je da sa kulturom tkiva sve je pod kontrolom.
Sa kulturom tkiva samo taj dio biljke iz kojeg pocinje rast ce biti razvijan pod idealnim (vjestackim) uvjetima.
Biljke ce biti ostavljene u komori za rast na u teglama sa hranljivom podlogom :to je zelatinozna tvar koja sadrzi sve hranljive tvari biljci lake za absorbiranje. Biljke su toliko vjestacki stimulirane da cak ne trebaju ni process fotosinteze. Vjestacka svjetlost je obezbijedjena da bi biljke zadrzale zelenu boju.
Veoma mali broj biljaka ce dobiti stimulaciju (u vidu hormonskih preparata) za brzo razvijanje I dijeljenje. Neke biljke se tako brzo dijele da formiraju skupine(strukove). Ostale biljke rastu vise u sirinu I od takvih biljaka bocno isce ce postati nova reznica.
Svakih 6 do 8 sedmica dijelovi biljke se dijele I nanovo sade . Brzina multiplikacije u ovoj fazi zavisi od faktora multiplikacije:broj dijelova iz kojih moze biti formirana tacka rasta tokom jednog sjecenja. Ovaj faktor se uobicajeno krece izmedju 2 I 5.
Primjer: Faktor multiplikacije je 3 ,ciklus rasta je 6 sedmica. Pocnemo sa 10 biljaka ,nakon 6 sedmica dobicemo 30 ,nakon 12 sedmica dobicemo 90 a nakon jedne godine bice vise od 60 000 biljaka!
Faza oziljavanja
Tokom multiplikacijske faze biljke nemaju ili jedva imaju korijenje. Naravno,biljke moraju biti isporucene klijentima sa korijenjem. Zato ce biljke biti postavljene na hranljivu podlogu kojoj su dodani hormoni (sto ce stimulisati oziljavanje) prije nego sto budu isporucene. Ova faza traje 6 do 8 sedmica. Nakon isporuke rasadniku ,biljke ce zahtijevati posebnu njegu. Pazljiva aklimatizacija je veoma vazna za dobar pocetak uzgajanja.
Kultura tkiva je zajednicki pojam za mnogo razlicitih metoda I tehnika. Klasifikacija moze biti prikazana po nacinu na koji je biljka stimulirana na rast I koji dio biljke ce se koristiti. Izbor odredjene tehnike zavisi I od vrste biljke I od cilja multiplikacije. Najcesce koristene metode su dolje navedene.
Kultura meristema
Ova metoda je dobila ime po tome sto je meristem drugi naziv za tacku rasta . Sa ovom metodom ,ekstremna tacka rasta ce biti izdvojena pod mikroskopom. Ovo je vrlo precizan posao ,ali vrijedi truda jer je tacka rasta u ovom slucaju uvijek zdrava bez bolesti (najcesce su to virusi). Ova veoma mala tacka rasta ce biti stavljena na medium (hranljiva podloga) I razvice izdanke te ovo moze biti pocetni material za neke druge metode.
“Auxillaire”(bocna) metoda
Sa ovom metodom ,tacka rasta ce razviti izdanke sa dna . Ovi izdanci ce formirati struk(skupinu). Ovaj struk ce biti izrezan na male dijelove I svaki ce formirati novi struk. Ovo se moze neprestano ponavljati dok se strukovi ne stave na hranljivu podlogu.
Metoda pazusnih pupoljaka
Kod vecine biljaka vec postoji tacka rasta na pazusnom dijelu lisne stabljike. Ako se stabljika slomi iznad (ili se odsijece) pocet ce ponovo rasti. Ova tacka rasta moze biti koristena za multiplikaciju. Nova stabljika ce porasti iz ovog okca,koja ce onda nanovo formirati nekoliko okaca. Nakon 6 do 8 sedmica ova stabljika moze biti rezana I sadjena.
Metoda sjecenja okca
Vrh svake nove stabljike je najbolji kao tacka rasta za dijeljenje.
Somatska embrio geneza
Ovo je potpuno drugaciji nacin multiplikacije.Tacka rasta ce biti ponovno biti svedena na nivo celije. Ove celije se stavljaju u tecan medium u kojem ce formirati nove zasebne celije. One ce biti postavljene na cvrsti medium na kojem ce rasti do forme nove biljke. Ova tehnika se ne moze primjenjivati bas na svakoj biljci. Osim toga,istrazivanja iziskuju velike troskove a rizik je dosta visok.
Infekcija
Sva oprema mora biti sterilna I svi materijali moraju biti pazljivo dezinfekovani prije koristenja. Sve te mjere su iz razloga sto je hranljiva podloga (medium) toliko bogata da pogoduje brzom razmnozavanju gljivica I bakterija. Iz hranljive podloge one napadaju biljku, inficiraju je dok je vrlo slaba I nakon nekog vremena uzrokuju gubitak biljnog materijala.
Rad u sterilnim uvjetima je imperativ. Laboratorijski radnici rade za laminarima cijim sistemom sterilan I visoko cist zrak cirkulise nad biljkom koju obradjuju. Slijedece mjere predostroznosti su :nosenje laboratorijske obuce,redovno dezinficiranje ruku I materijala.
Ako se prenese blago inficirana biljka,infekcija se moze vrlo lako rasiriti. Stoga je vrlo vazno kontrolisati da li postoji infekcija prije obrade I presadjivanja biljke.
Epruvete,kontejneri I plasticne posude
Postoji mnogo razlicitih posuda koje se koriste za kulturu tkiva. Epruvete se koriste u ranoj fazi,kada su biljke po jedna u svakoj epruveti (radi prevencije infekcije).Nakon te faze jeftinije je da se koriste plasticne posude ali to nije moguce koristiti za sve vrste pa se ponekad koriste stakleni kontejneri.
Priprema media : tajna proizvodjaca!
Osim koristenja ispravne metode I precizne tehnike sjecenja,vrlo je vazno na koji se nacin priprema medium. Svaka laboratorija razvija svoj sopstveni recept media po vrsti biljke ,sto podrazumijeva dosta rada I troskova.
Laboratorija kulture tkiva dosta nalikuje farmaciji. Posvuda se nalaze bocice sa prahom,pilule I tekucine. Osim toga postoje neke mjere predostroznosti I tehnike mjerenja jer medium mora biti pripremljen vrlo precizno.
Aplikacije
Brza multiplikacija
Ako se neka sorta brojcano otezano povecava ili se povecava samo u odredjenom periodu godine ,onda je kultura tkiva odlicno rjesenje za brzu multiplikaciju. Unutar laboratorije lakse je uticati na uvjete za razvoj I multiplikacija je moguca tokom citave godine. Brza multiplikacija vodi ka nizim proizvodnim troskovima .
Upotrebom kulture tkiva moguce je vrlo brzo proizvesti veci broj visoko kvalitetnih biljaka .
Brzina je takodje vazna za selektivne kompanije. Rijetka ili nova sorta moze brojcano vrlo brzo biti povecana.
Vise istovjetnog biljnog materijala
Kultura tkiva je zapravo vid kloniranja. Mnogo hiljada potomaka jedne vrlo precizno selektirane maticne biljke ce na kraju omoguciti proizvodnju skoro identicnih proizvoda.
Sezona uzgajanja
Mnoge biljke imaju vrlo specifican period godine kada mogu biti brojcano uvecane . Ovo vodi ka debalansu izmedju ponude I potraznje. Koristeci kulturu tkiva moguce je da bilo koja sorta bude proizvedena u bilo kojem periodu godine.
preuzeto sa sajta
www.faassen.nl/plantar...ulture.htm
mozda nekog zainteresuje
Poslato: Pon Jun 08, 2009 4:30 pm----
Tata već više od pola godine skuplja stvari za to raspitaću se odakle ali mislim iz mađjarske, evo i slike, i jedan koristan web
www.kitchenculturekit....byists.htm
Poslato: Pon Jun 08, 2009 5:19 pm----
HEY
super izgleda prava mala laboratorija
bas mi je drago da se neko javio
mozes i na pp da nebude reklama
Poslato: Uto Jun 09, 2009 8:43 pm----
itan-Šta si mislio razmnožavati tako?
Poslato: Uto Jun 09, 2009 10:37 pm----
| Gilvazi citat: |
| itan-Šta si mislio razmnožavati tako? |
nadam se da cemo razmenjivati iskustva i svasta nesto
u ovoj nasoj zemlji bas treba imati strpljenja upornosti za ovaj hobi
pozdrav
Poslato: Sub Okt 03, 2009 3:46 pm----
Gde naci Potassium Hydroxide 1 N KOH?
Poslato: Sub Okt 03, 2009 8:13 pm----
Itan to ti je rastvor kalijum hidroksida u vodi ali nigde ga nećeš naći takav. Rastvor je nestabilan i vremenom se menja ta koncentracija tako da se uvek priprema neposredno pre primene.
Kupi čisti kalijum hidroksid i rastvori 56g u 1l destilovane vode. To je 1N KOH.
Poslato: Sub Okt 03, 2009 8:53 pm----
hvala drveni
samo jos da vidim gde ima da se kupi ,ako imas info molim te posalji mi pp
hvala jos jednom !
Poslato: Pet Feb 05, 2010 1:54 pm----
vrlo skup nacin razmnozavanja...oprema je neophodna-autoklav,osmotron,laminar,uzgojne komore,pribor,posudje....hemikalije,hm-gotovi praskasti mediji M&S,WPM ili neki drugi(smuckati jedan murashige skoog medium je prava gnjavaza,kad mozes kupiti gotov u prahu za 5,10,50 litara medija,po prilicno povoljnoj cijeni),hormoni (BAP,IBA,NAA,GA su prilicno skupi,ali to ionako ide u malim kol),sredstvo za zeliranje(agar,gelrite).Velika opasnost od kontaminacije,ako nisu sterilni uslovi uzgoja,cak i ako se stavi parafilm.Niko ti nece reci recept za medij,rijetko ko ce ti reci protokol pri izdvajanju meristema ili eksplantanta.
Mikrorazmnozavanje kao vid istrazivanja-uvijek,pri fakultetima,institutima ...
Poslato: Pon Maj 17, 2010 11:10 pm----
Bas mi je drago da sam naletela na ovakvu diskusiju pa da se i ja ukljucim. Skupa metoda za proizvodnju van institucija, sve moze da se improvizuje osim hemikalija. Pitanje: da li ste culi da neko to radi kod nas?
Poslato: Sre Maj 19, 2010 2:52 pm----
| pitalicamica citat: |
| Bas mi je drago da sam naletela na ovakvu diskusiju pa da se i ja ukljucim. Skupa metoda za proizvodnju van institucija, sve moze da se improvizuje osim hemikalija. Pitanje: da li ste culi da neko to radi kod nas? |
osim na INSTITUTU ZA BIOLOŠKA ISTRAŽIVANJA "SINIŠA STANKOVIĆ u naucne svrhe ,
bilo bi lepo kad bi neko napravio neku sekciju u botanickoj basti pa da se jave svi koji su zainteresovani u ponesu biljke i sve ostalo pa tamo malo da ucimo i radimo nesto prakticno ...pozdrav
Sva vremena su GMT + 1 sat